学习的最佳提取方法具有挑战性的样本类型

RNA隔离的挑战

RNA隔离是一个挑战性的过程。与DNA,这是高度稳定,RNA很不稳定,迅速消化核糖核酸酶酶如果不立即抑制他们的活动。传统RNA隔离协议也是乏味的,耗时的,不能攀登的。因为RNA隔离许多科学企业至关重要,研究人员优化协议和试剂加速和简化这个过程。

一个受欢迎的试剂RNA隔离协议将试剂盒^®。由苯酚和硫氰酸胍在单相解,试剂盒^®(或三试剂^®)是一种细胞溶菌作用和RNase-inhibiting解决方案用于同时隔离的RNA, DNA和蛋白质的生物样本。三试剂的组件^®方便直接和有效抑制核糖核酸酶活性和隔离RNA从人类,动物,植物,真菌,细菌,病毒样本数量一致的性能在所有的组织或细胞培养。

试剂盒^®从一系列孤立RNA样品

试剂盒^®是专门制定隔离任何样本类型的总RNA在现代研究实验室,无论是在学术界还是工业:细胞,很难溶解或固体组织,传染性生物样本。

细胞

试剂盒^®允许高效的从细胞RNA隔离,因为它很快分解细胞结构,使其失去活性RNA样本,保护RNA的降解。

Hard-to-Lyse或坚实的组织样品

试剂盒的化学组成^®也促进了RNA的释放hard-to-lyse细胞和组织样本借助机械均化和/或蛋白酶K治疗。

传染性生物样本

试剂盒^®病原体灭活在血浆、血清、粪便、血液,和其他生物样品类型,消除感染的风险研究和简化RNA提取。

小贴士高效RNA提取试剂盒^®

RNA提取与试剂盒^®结合酚和硫氰酸胍单相的解决方案,促进直接和有效抑制核糖核酸酶的活动。然而,当准备RNA生物样本隔离,某些因素应该考虑的一个最优的结果。这里有一些样品制备方法,以确保有效的从细胞中提取RNA, hard-to-lyse /固体组织,和传染性生物样本:

细胞

由于他们的细胞结构,哺乳动物细胞容易溶解在试剂盒^®,一般不需要额外的化学溶解或机械的趋同性。最大化RNA分离效率,坚持以下试剂盒在准备细胞^®:

• 加1毫升试剂盒^®5 - 10 x 10⁶新鲜的,颗粒状哺乳动物细胞。吸管向上和向下,直到细胞完全细胞溶解和同质。
• 技巧1:如果溶解产物仍然是多云,不透明,和/或粘性,增加试剂盒的体积^®直到清晰。
• 技巧2:与试剂盒溶解后^®离心机,以最大速度溶解产物1 - 2分钟,将上层清液转移到一个新的管前处理。离开至少50μl旧管的底部,以避免转移球的一部分。

Hard-to-lyse /固体组织和传染性的生物标本

坚实的组织,包括心脏、肺、肝脏、肌肉、软骨,更难以溶解细胞。另外,革兰氏阳性细菌和酵母细胞(例:杆菌、李斯特菌、酵母属)也被认为是hard-to-lyse由于细胞壁的多糖。

传染性生物样品,如血浆、血清、凳子上,和全血,是复杂的,高度proteinated样本的简单和tough-to-lyse组件,因此应当像hard-to-lyse样品处理。RNA分离效率最大化,遵循以下在准备tough-to-lyse样本,坚实的组织,和传染性生物样本的试剂盒^®:

• 技巧1:不同的细胞,这些样本类型需要额外的化学溶解和/或机械均化。
  • 我们建议机械均化溶解这些样本的最优方法。高速均质化(例如,贝尔坦公司Precellys),加1毫升试剂盒^®一个新鲜的组织样本10% (w / v)和珠打在最大速度为30 - 60秒。低速均匀化(如粉碎机精灵),珠打在最大速度5 - 10分钟。确切的时间是泛型类型的示例。
  • 与蛋白酶K裂解的化学处理也可以执行,要么有或没有机械均化。如果机械进行均质化,把样品蛋白酶K 30分钟。如果不是,提高蛋白酶K治疗时间2 - 5小时。
• 技巧2:均化和/或蛋白酶K治疗后,离心机任何碎片和上层清液转移到一个新的管前净化。
• 技巧3:如果上层清液/溶解产物仍然是多云的,不透明的和/或粘性,增加试剂盒的体积^®直到清晰。

从试剂盒提取RNA与Direct-zol RNA包7分钟

传统的试剂盒^®RNA提取是一个复杂的,耗时的协议。一旦细胞细胞溶解,然后通过添加bromochloropropane必须经过匀浆或氯仿和离心法。离心后,可以看到三个阶段:水相(RNA),有机相(DNA)和间期(蛋白质)。

RNA从水相加入异丙醇沉淀,用乙醇洗涤,增溶的最后的RNA颗粒。在这个过程中每一步都是繁琐,耗费时间,花一个多小时的整个过程中,必须小心。RNA产量和纯度往往妥协由于不完整的细胞裂解,苯酚污染的水相的阶段,或不完全溶解最终RNA丸。

Direct-zol RNA包由Zymo研究,旨在处理试剂盒^®、三试剂^®或类似acid-guanidinium-phenol试剂为基础,实现总RNA提取,包括小/ microrna,从任何样品只有7分钟。Direct-zol RNA设备,您将获得一致的结果,更高的RNA收益率(4倍以上),和一个更快的处理时间比传统的RNA隔离方法。没有氯仿或相分离是必要的,并没有降水措施,消除水相污染和不完全溶解RNA丸。

隔离与Direct-zol RNA RNA装备,只需添加样本细胞溶解在试剂盒^®直接Zymo-Spin列绑定,洗,洗提RNA。已经没有dna的细胞RNA是任何下游应用程序准备,包括下一代测序(门店),RT / qPCR,墨迹,北部和其他协议要求纯粹的RNA。

Direct-zol方法也可以扩大和自动化直接- zol - 96 MagBead RNA工具包兼容任何机器人样品处理器(例如,汉密尔顿,翠鸟和Tecan)——使高通量、快速提取高质量的RNA可以访问任何研究实验室。

的经验快速、高效的RNA提取

RNA提取不一定是一个可怕的科学协议的一部分。Direct-zol RNA设备使RNA隔绝任何样本类型——包括很难溶解/固体组织样本-微风。由于其无与伦比的速度和隔离高收益的能力,纯从多种类型的细胞和组织RNA, RNA的Direct-zol RNA工具包是最佳的解决方案从样本中提取试剂盒^®。如果你想体验自己的力量快速、可伸缩的RNA提取,访问我们的网站更多地了解Direct-zol RNA工具包请求你的免费样品。

2022年4月28日