如何从拭子中提取RNA和唾液样本吗

最好的高效的RNA提取方法

COVID-19测试以来每个人的心灵的最前沿的流行在2020年初开始。但进入COVID-19测试,或任何呼吸道病毒测试吗?设备用于样本收集什么?必威体育电脑版RNA提取所涉及的步骤是什么?和测试解决方案如何进化到满足不断变化的需求的流行病?

通常检测COVID-19样本类型是什么?

COVID-19测试开始收集样本。因为SARS-CoV-2呼吸道病毒,这个样本通常是收集在上呼吸道系统。上呼吸道感染细胞的病毒RNA,然后可以很快检测到逆转录酶聚合酶链反应(rt - pcr)或者更多的特异性基因测序。

拭子样本,收集到的上或下部分喉(鼻咽、口咽,分别),被认为是黄金标准由于其高灵敏度。^[1]然而,这些拭子样品必须由训练有素的医疗专业人员收集穿着完整的个人保护装备(PPE)。这个需求已经导致整个COVID-19 PPE短缺大流行,阻塞大量测试工作。

唾液样本已成为替代拭子样本病毒诊断。唾液样本容易收集,他们不仅可以镇定的安慰一个人的家,他们的敏感性与拭子样本。这些特性让唾液样本一个有吸引力的补充拭子样本。

如何从唾液中提取RNA &拭子样品吗

下一步后样本收集RNA提取。必威体育电脑版但是如何RNA提取唾液和拭子样本的工作吗?它不同于其他类型的样品吗?

使用旋转列时,唾液和拭子样本的总RNA提取工作流程类似于其他类型的示例。自旋列RNA提取中有四个基本步骤:

样品裂解,裂解缓冲直接添加到样本。在SafeCollect集合包,DNA / RNA盾作为一个一体化的样品溶解和保存缓冲区。(换句话说,样品裂解发生在样本收集)。必威体育电脑版一些RNA提取包可能包括裂解管机械溶菌作用和酶酶裂解(例如蛋白酶K)。
绑定RNA -裂解后,乙醇或异丙醇添加到示例中,混合,然后整个混合添加到旋转列。添加酒精有助于促进RNA绑定到列的二氧化硅矩阵。RNA是由离心接触到硅矩阵。可选地,可以应用DNase列RNA后绑定(步骤2)消除污染的DNA。
洗RNA, RNA绑定后,它可以被应用洗洗含有乙醇的缓冲区。因为乙醇促进RNA绑定到列的二氧化硅矩阵,RNA是保留在列在洗涤/离心。可以做额外的离心去除残留乙醇的列矩阵。
洗提RNA——一个洗脱缓冲(通常nuclease-free水或Tris-EDTA缓冲区)应用于列。洗脱缓冲水合物RNA,允许它使分离柱的二氧化硅矩阵。最后一个离心步骤池净化RNA样品收集管的底部,准备分析。

另外,高通量工具包使用磁珠的旋转列,但一般的工作流程是相同的。样品溶解了,RNA是绑定到珠子,珠子是洗,RNA从珠子终于筛选了。

如何选择一个RNA净化设备吗

选择最好的RNA净化设备为您的应用程序可以令人生畏的,因为有很多可用的选项,它并不总是清楚包之间存在的差异。

Zymo研究提供了多种提取工具,作为一个完整的工作流的一部分。从基于列automation-friendly包,选择取决于您的特定的实验需求。对于今天的大流行,快速dna / RNA病毒工具的高通量早期病毒检测的解决方案。

快速dna / RNA病毒工具包是专为快速恢复病毒DNA / RNA从不同的样本类型,包括唾液和拭子样本。DNA / RNA净化装备有DNA / RNA盾样本采集、病毒失活,核酸保存。必威体育电脑版如果你使用Zymo收集样本研究DNA / RNA盾样本收集设必威体育电脑版备,您可以直接进行净化。此外,艾滋病的工具包功能一步绑定缓冲高效提取和低复制病毒检测。

可选地,减少样品的粘度,唾液会很粘!——蛋白酶K消化使样品处理简单,也消除了核酸酶可以降解核酸样本。一个最近的信件新英格兰医学杂志》上蛋白酶K的比较唾液和棉签COVID-19测试。^[2]